¿Qué es ELISA Microplate Reader?
El lector de microplacas, es decir, el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas, es un instrumento especial para el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas. De hecho, es un colorímetro fotoeléctrico especial o espectrofotómetro disfrazado, y su principio de funcionamiento básico es básicamente el mismo que la estructura principal y el colorímetro fotoeléctrico. Se puede dividir simplemente en dos categorías, semiautomática y totalmente automática, pero sus principios de funcionamiento son básicamente los mismos. Su núcleo es un colorímetro, es decir, el método colorimétrico se utiliza para analizar el contenido de antígeno o anticuerpo. La determinación de ELISA generalmente requiere que el volumen final de la solución de prueba sea inferior a 250 μL, y la prueba no se puede completar con un colorímetro fotoeléctrico general, por lo que existen requisitos especiales para el colorímetro fotoeléctrico en el lector de microplacas.
Principio
El lector de microplacas es en realidad un colorímetro o espectrofotómetro fotoeléctrico de propósito especial disfrazado, y su principio de funcionamiento básico es básicamente el mismo que la estructura principal y el colorímetro fotoeléctrico. La figura muestra el trabajo de un lector automático de microplacas de muestreo de un solo canal. Diagrama esquemático. La onda de luz emitida por la lámpara fuente de luz se transforma en una luz monocromática por el filtro o monocromador, y entra en la muestra bajo prueba en el polo microporoso de plástico. Parte de la luz monocromática es absorbida por la muestra, y la otra parte se transmite a través de la muestra Iluminada al fotodetector, el fotodetector convierte las diferentes señales de luz de la muestra a probar en señales eléctricas correspondientes. Las señales eléctricas se procesan mediante preamplificación, amplificación logarítmica y conversión de analógico a digital. Ingrese al microprocesador para el procesamiento y cálculo de datos, y finalmente muestre los resultados por la pantalla y la impresora. El microprocesador también controla el movimiento del mecanismo de accionamiento mecánico en la dirección X y la dirección E para mover la microplaca a través del circuito de control, a fin de realizar el proceso de detección automática de muestreo. Otros lectores de microplacas utilizan el movimiento manual de la microplaca para la detección, por lo que se omiten el mecanismo de accionamiento mecánico y el circuito de control en las direcciones X e Y, de modo que el instrumento es más pequeño y la estructura es más simple.
La microplaca es una placa de plástico transparente especialmente utilizada para colocar la muestra a ensayar. La placa tiene múltiples filas de pequeños orificios de tamaño uniforme, y el antígeno o anticuerpo correspondiente está incrustado en el agujero. Cada pequeño orificio puede contener unos diez mililitros de solución.
La luz es una onda electromagnética. La longitud de onda de 100nm-400nm se llama luz ultravioleta, la luz entre 400nm y 780nm puede ser observada por el ojo humano, y la longitud de onda mayor de 780nm se llama luz infrarroja. Las personas solo pueden ver los colores porque la luz golpea el objeto y es reflejada por el objeto. Las plantas verdes son verdes porque la mayoría de las plantas absorben la luz rojo-naranja y la luz azul-violeta, pero no absorben y reflejan el verde, por lo que las plantas parecen verdes. El principio de la medición del lector de microplacas es detectar la absorbancia del analito en una longitud de onda específica.
Estructura
Hay placas de 40 pocillos, placas de 55 pocillos, placas de 96 pocillos, etc. Diferentes instrumentos utilizan diferentes placas de orificio, que se pueden probar una por una o fila por fila.
La luz monocromática utilizada por el lector de microplacas se puede obtener a través de un filtro coherente o del mismo monocromador que un espectrofotómetro. Cuando se usa un filtro como dispositivo de filtro, es lo mismo que un colorímetro ordinario. Se puede colocar delante de la microplaca o detrás de la microplaca. Después del condensador, el diafragma llega al reflector, es reflejado por el reflector a 90 ° y pasa a través de la solución colorimétrica verticalmente, y luego se envía a través del filtro. A la fotocélula.
Del diagrama de bloques de trabajo y el diagrama de ruta de luz del lector de microplacas, se puede ver que tiene las siguientes diferencias con los colorímetros fotoeléctricos ordinarios:
(L) El recipiente para la solución colorimétrica que se va a probar ya no utiliza una cubeta, sino una microplaca de plástico. La microplaca generalmente está hecha de material de polietileno transparente, que tiene un fuerte efecto de adsorción sobre el antígeno y el anticuerpo, por lo que se utiliza Actúa como portador de fase sólida.
(2) Debido a que la microplaca de plástico que contiene la muestra es porosa de varias filas, la luz solo puede pasar verticalmente, por lo que el haz de luz del lector de microplacas pasa a través de la solución que se va a probar y la microplaca verticalmente. El haz de luz puede ser de arriba a abajo o puede pasar a través del fluido colorimétrico de abajo hacia arriba.
(3) Los lectores de microplacas generalmente no solo usan A, sino que a veces también usan OD de densidad óptica para expresar la absorbancia. Los lectores de microplacas se pueden dividir en dos tipos: de un solo canal y multicanal, y los de un solo canal se dividen en dos tipos: automáticos y manuales. Tipo de instrumento automático Hay un mecanismo de accionamiento mecánico en las direcciones X e Y, que puede enviar los pequeños orificios de la microplaca L uno por uno debajo de la viga para pruebas, y el tipo manual utiliza el movimiento manual de la microplaca para la medición.
Sobre la base del lector de microplacas de un solo canal, se ha desarrollado un lector de microplacas multicanal. Este tipo de lector de microplacas generalmente está automatizado. No tiene múltiples haces y múltiples fotodetectores, como un instrumento de 12 canales con 12 haces o 12 fuentes de luz, 12 detectores y 12 amplificadores, bajo la acción del dispositivo de accionamiento mecánico en la dirección X, se detectan 12 muestras seguidas. La velocidad de detección del lector de microplacas multicanal es rápida, pero su estructura Los precios más complejos también son más altos.
Rango de aplicación del lector de microplacas
Prueba de hematología Prueba de anticuerpos relacionados con plaquetas PAIgA, PAIgG, PAIgM
Determinación del Dímero D-Dímero
Determinación de productos de degradación de fibrina sérica FDP
Determinación de T3, T4 con triyodotironina y tetrayodotironina
Prueba inmunológica C-reactiva determinación de proteína C CRP
Determinación de inmunoglobulina IgD, IgE
Determinación de complejos inmunes circulantes CIC
Determinación del factor reumatoide IgG, IgA, IgM RF
Anticuerpo antitiroglobulina, determinación de anticuerpos microsomales TG, TM
Cáncer tumoral Detección inmunológica Determinación de alfa-fetoproteína AFP
Determinación del antígeno carcinoembrionario CEA
Determinación del antígeno prostático específico PSA
Determinación de cáncer de páncreas, cáncer de vías biliares, cáncer gástrico CA19-9
Determinación de cáncer de ovario CA125
Determinación del cáncer de mama CA15-3
Determinación del carcinoma de células escamosas cervical SCC
Detección de cáncer de médula ósea múltiple
Determinación de cáncer de tiroides hTG
Prueba inmunológica de enfermedades infecciosas, prueba serológica de hepatitis A, anti-HAV-IgM
Prueba serológica de hepatitis B Dos pares y medio
Detección serológica de hepatitis C Anti-HAV-IgG, anti-HCV-IgM
Detección serológica de hepatitis D Anti-HDV-IgG, anti-HDV-IgM
Detección serológica de hepatitis E Anti-HEV-IgG
Detección de anticuerpos contra la fiebre hemorrágica con síndrome renal HFRS-IgG
Detección del anticuerpo IgM del virus de la encefalitis japonesa
Detección de anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (es decir, SIDA regional) VIH β 2 M
Prueba de función de atención prenatal y postnatal Prueba del virus toxoplasma TOXO
Detección del virus de la rubéola RV
Detección de citomegalovirus CMV
Detección del virus del herpes simple Anti-HSV (I., II.)
Otros también pueden hacer pruebas genéticas y residuos animales, artículos de inspección de residuos de pesticidas, etc.
